目前使用核苷類似物治療乙肝已經(jīng)成為臨床治療乙肝的主流,，其優(yōu)點(diǎn)是口服方便，迅速抑制HBV復(fù)制,，防止或延緩慢性乙肝進(jìn)展為肝硬化或肝癌,。
一、乙肝病毒耐藥基因檢測(cè)的臨床意義
由于患者長(zhǎng)期服藥,，乙肝病毒的每一個(gè)基因區(qū)(包括S,、P、C,、X等全部4個(gè)基因)均可發(fā)生突變,，使抗病毒治療耐受、免疫耐受和免疫逃避等,，進(jìn)一步造成臨床肝病的慢性化和復(fù)雜化,，加重患者的病情和治療困難。因此,，乙肝病毒耐藥基因檢測(cè)對(duì)判斷患者病情,、選擇治療方案、合理用藥和降低患者治療費(fèi)用等具有重要臨床意義,。
二,、乙肝病毒耐藥基因檢測(cè)適用人群
根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委發(fā)布《乙型病毒性肝炎篩查及管理》標(biāo)準(zhǔn)，乙型肝炎篩查結(jié)果為抗-HBV陽(yáng)性,、HBV DNA定量檢測(cè)陽(yáng)性,，確診感染乙型肝炎的患者，服用拉米夫定,、替比夫定,、阿德福韋酯,、恩替卡韋等抗病毒藥治療5個(gè)月，服藥前后的動(dòng)態(tài)檢測(cè),，為臨床追蹤評(píng)價(jià)抗病毒治療效果,。
三、本院開(kāi)展乙肝病毒耐藥基因檢測(cè)情況
1.本院乙肝病毒耐藥基因檢測(cè)技術(shù)
我們主要針對(duì)拉米夫定,、恩替卡韋,、阿德福韋酯和替比夫定等藥物的所有變異位點(diǎn)(如：與拉米夫定、替比夫定相關(guān)的rtM204I/V/S,、rtL180M,、rtV173L；與阿德福韋酯相關(guān)的rtA181T/V,、rtN236T,、rtV214A或rtQ215S；與恩替卡韋耐藥相關(guān)的rtI169T,、rtT184A/G/I/S,、rtS202G/I或rtM250V等變異位點(diǎn))，采用國(guó)內(nèi)外先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)：一,、實(shí)時(shí)熒光定量PCR基因擴(kuò)增技術(shù),，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)后各探針的CT值結(jié)果，判斷是否發(fā)生已知204位點(diǎn)的V/I位點(diǎn)的變異,。該技術(shù)應(yīng)用廣泛,，也可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因位點(diǎn)；檢測(cè)結(jié)果快速準(zhǔn)確,；二,、低密度微陣列基因芯片檢測(cè)技術(shù)，,，一次性的快速檢測(cè)各個(gè)耐藥突變位點(diǎn),。同時(shí)，為了確定檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,我們隨機(jī)抽取部分患者的PCR產(chǎn)物直接測(cè)序,實(shí)時(shí)熒光定量PCR聯(lián)合基因芯片的判讀結(jié)果與測(cè)序結(jié)果一致,，進(jìn)一步證實(shí)了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確,，可靠性。對(duì)判斷患者病情,、選擇好的治療方案,、合理用藥和降低患者治療費(fèi)用等具有重要意義,。
2.本院開(kāi)展乙肝病毒耐藥基因進(jìn)展：
本院采用國(guó)內(nèi)新的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法,、應(yīng)用美國(guó)ABI公司的ViiA7實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)，該方法應(yīng)用廣泛,，可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因位點(diǎn),；檢測(cè)結(jié)果快速準(zhǔn)確,。同時(shí)，采用低密度微陣列基因芯片檢測(cè)技術(shù),，應(yīng)用PCR擴(kuò)增儀,、低密度微陣列基因芯片雜交儀、電泳儀,、凝膠成像系統(tǒng)等國(guó)內(nèi)先進(jìn)的設(shè)備,，一次性的快速檢測(cè)各個(gè)耐藥突變位點(diǎn)，是診斷,、監(jiān)測(cè)乙肝病毒耐藥基因常用的方法,。同時(shí)，我們隨機(jī)抽取部分患者的PCR產(chǎn)物用測(cè)序的方法進(jìn)行驗(yàn)證,，充分證實(shí)了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確,，可靠性。
乙肝病毒耐藥基因檢測(cè)的檢測(cè)人員均通過(guò)臨床檢驗(yàn)中心的臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室技術(shù)培訓(xùn),，并取得合格證書,；自2003年開(kāi)展乙肝病毒耐藥基因檢測(cè)項(xiàng)目以來(lái)，檢測(cè)數(shù)量逐年增加,，而且由于設(shè)備及試劑盒的更新,，檢測(cè)的敏感性及準(zhǔn)確性也大大提高，截止2014年的檢測(cè)量已達(dá)到4000多例,。
乙肝病毒耐藥基因檢測(cè)為拉米夫定,、替比夫定、阿德福韋酯,、恩替卡韋治療12個(gè)月的患者進(jìn)行服藥前后的動(dòng)態(tài)檢測(cè),，為臨床追蹤評(píng)價(jià)抗病毒治療效果的提供了較好的方法，結(jié)果更準(zhǔn)確,、相對(duì)更早地確定患者體內(nèi)是否存在變異株,，是臨床追蹤評(píng)價(jià)抗病毒治療效果的好方法。為臨床醫(yī)師及時(shí)提供患者的準(zhǔn)確的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù),，從而觀察患者的病情進(jìn)程和用藥情況,，具有顯著的社會(huì)效益。
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