固定的意義一是停止細胞中的生化反應,，固定其中的各種生化物質(zhì)狀態(tài),，防止分解；二是固定細胞形態(tài),，防止其變形或破裂,。
固定劑的分類
固定劑分為醛類(常用甲醛,、戊二醛和多聚甲醛)、醇類(常用乙醇),、其它(丙酮),。
作用機制及用途
1.醛類(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)：
(1)4%中性甲醛：
原理：形成分子間的交聯(lián),，影響蛋白構(gòu)型而使之固定,。
用途：病理科用于診斷的病理組織常用此法固定。配制成10%中性甲醛(福爾馬林) ,。
優(yōu)點：形態(tài)結(jié)構(gòu)保存好,，且穿透性強，組織收縮少,。
缺點及注意事項：
?、偌兹┓胖眠^久可氧化為甲酸，使溶液pH降低,影響染色,；因此縮短固定時間,，降低固定溫度(4°C)，組織塊不宜過厚。
?、诜肿娱g交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色結(jié)果,。切片在作免疫組化染色前,，先經(jīng)預處理使抗原再現(xiàn)(抗原修復)。
(2)戊二醛
原理：對于蛋白質(zhì),、核酸,、多糖及細胞內(nèi)微管、滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),、紡錘絲,、胞飲小泡、和細胞基質(zhì)固定良好,。
用途：電鏡細胞化學研究,。
優(yōu)點：穿透力強，可達4mm/h,；固定后可在4度冰箱長期保存(數(shù)周-數(shù)月),；保存細胞微細結(jié)構(gòu)效果好。
缺點：
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②不穩(wěn)定,，易氧化,。
(3)多聚甲醛
原理：通過與蛋白多肽鏈氨基酸側(cè)鏈的功能集團，使蛋白多肽分子間形成亞甲基橋(-CH2-)蛋白質(zhì)不再發(fā)生改變,，保存原位,。
用途：4%的多聚甲醛可用于免疫電鏡；也可用于免疫熒光染色,。1%的多聚甲醛可用于流式細胞術(shù)標本的固定,。
優(yōu)點：對組織穿透性好,，組織收縮小,，對大多數(shù)抗原物質(zhì)保存較好，特別是對脂肪和各種酶的固定效果更好,。
缺點：配制方法繁瑣,，需要加熱及長時間攪拌。
2.醇類(常用乙醇)
(1)乙醇
原理：高滲透的小分子非極性物質(zhì),，其可以迅速滲透到細胞內(nèi)部,，固定微細結(jié)構(gòu)，如糖蛋白、白蛋白,，滲透力強,。
用途：95%的乙醇可用于細胞爬片的固定；70%的乙醇可用于流式細胞檢測樣本的固定,。
優(yōu)點：穿透性強,、抗原性保存好。
缺點：
?、?5%乙醇脫水性強,，易引起組織收縮、變硬,，影響切片質(zhì)量,因而固定時間不宜過長(2小時內(nèi)),。
②乙醇使蛋白變性程度輕,，固定后蛋白可再溶解,，在染色中孵育時間長的情況下，抗原可流失,，并減弱反應強度,。
3.其它
(1)丙酮
原理：溶解膜磷脂，所有的脂質(zhì)雙層(胞膜,、核膜,、細胞器膜等)將被破壞，但蛋白和多糖類不受影響,。
用途：可用于細胞爬片的固定
優(yōu)點：
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?、诳扇馨?、核膜，如果染胞漿或胞核可不用或少用細胞打孔劑,。
缺點：
?、俦膿]發(fā)性很強，有毒,，可對中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生抑制,。
②需提前預冷處理,，固定后結(jié)構(gòu)稍不完整,。
③如果用孔板做,，丙酮會將孔板溶掉,。
(2)Bouin固定液：非常適用于睪丸活檢組織的固定,。Bouin液對組織固定較均勻，收縮很少,，不會使組織變硬變脆,。需現(xiàn)配現(xiàn)用。
(3)Carnoy固定液：穿透能力強,，可很好的固定細胞質(zhì)和細胞核,，非凡適用于固定外膜致密的組織，也適用于糖原及尼氏小體的固定,。
(4)Zenker固定液：經(jīng)此液固定的標本,，細胞核和細胞質(zhì)染色頗為清楚，但成本較高且需非凡處理汞,。該固定液要避免接觸陽光,，以免引起化學變化而失效。
(5)乙醚(或三氯甲烷)與乙醇等量混合對組織穿透性極強,，即使涂片上含較多的黏液,，固定效果仍較好，是理想的細胞固定液,。
以上是對各種固定劑進行簡單匯總,，希望各位科研人員在實驗中理清思路、避免混淆,，根據(jù)不同實驗選擇合理的固定液,。
(劉輝)
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